2人目の暗殺者である触手を持つ少年・堀部糸成(イトナ)が、『兄』と呼ぶ殺せんせーの命を奪うことだけを目的にE組へと転校してくる。彼の登場により殺せんせーは珍しく本気の決闘を強いられ、生徒たちは担任を殺すために本当に必要なものは何かを考えさせられる。
烏間は防衛省から2人目の転校生とその保護者が来ると知らされ、殺せんせーに伝える。律の解説によれば、本来は遠距離担当のAIである律と近距離担当の新人が連携する予定だったが、協力体制が取れず、また少年の実力が彼女を遥かに上回っていたため計画が頓挫したという。そこへシロと名乗る白い服の男が保護者として現れ、教室の背面の壁を突き破って堀部糸成が登場する。糸成は自分は壁よりも強いと宣言し、自分たちは『兄弟』であると主張して、放課後に殺せんせーへ勝負を挑む。
一日を通して、生徒たちは2人の間に不気味なほど共通した習性があることに気づくが、殺せんせーは自分は一人っ子として育ったと主張し、血縁関係を否定する。
教室の机が片付けられてリングが作られ、机の境界線を越えたら負け、さらに生徒に危害が及んだ場合は反則負けというルールが提示される。シロの合図で試合が始まると、一瞬で殺せんせーの触手が切断され、さらに糸成の髪から殺せんせーと同じ触手がうごめく光景に全員が衝撃を受ける。殺せんせーの弱点と、反応を鈍らせるシロの特殊な光を利用して糸成は優位に立つが、殺せんせーはあらかじめ散りばめた対先生用ナイフで攻撃を受けたフリをし、脱皮した皮で糸成を包み込んでリング外へと投げ飛ばし勝利を収める。
暴れる糸成をシロは手首の装置で気絶させて連れ去り、殺せんせーがシロに手を伸ばすと触手が破壊され、その白い衣装が対先生用物質で作られていることが判明する。その後、刺激を受けた生徒たちは他人に暗殺を任せるのではなく、自分たちの手で成し遂げるため、烏間にさらなる指導を乞うのだった。
転校生は堀部糸成である。触手を持つ少年である彼は、「転校生の時間・2時間目」でE組に加入し、自分を「兄」と呼ぶ殺せんせーを追い詰めて殺すことだけを目的としている。
「転校生の時間・2時間目」にて、糸成はシロと名乗る保護者を伴って現れる。この男は、殺せんせーが攻撃を仕掛けた際に、対殺せんせー物質で構成されていることが判明する。
『転校生の時間・2時間目』では、教室がリングとなり、机の境界線を越えた対戦相手が負けとなる。また殺せんせーは、生徒が一人でも傷ついた場合は自動的に不戦敗になると付け加えた。
『転校生の時間・2時間目』において、殺せんせーは攻撃を受けたように見せかけるため対先生ナイフを撒き散らし、脱皮した自身の皮でイトナを包み込んでリング外に投げ飛ばすことで勝負に勝利する。
「転校生の時間・2時間目」は原作漫画の第29話から第32話までをアニメ化しており、堀部糸成とシロの双方の初登場回となっています。
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