In coppia con Jūzō per una missione nel Paese dell'Acqua, Itachi risveglia l'Amaterasu contro il Quarto Mizukage Yagura, perde il suo compagno e torna in un'Akatsuki che assottiglia le proprie fila e rimescola le coppie.
Jūzō interroga Itachi su Duy, raccontando come l'uomo abbia sconfitto da solo quattro dei Sette Spadaccini della Nebbia. I due confrontano brevemente le loro forze prima di portare a termine un assassinio. L'Akatsuki si riunisce quindi, e Pain aggiorna i membri sui progressi dell'organizzazione e sulla crescente notorietà, delineando l'obiettivo di raccogliere i Cercoteri.
Jūzō viene inviato in una missione nel Paese dell'Acqua che trova sgradevole, e per evitare di essere catturato dai ninja cacciatori ordina a Itachi di ucciderlo qualora venisse preso. La coppia completa il lavoro ma viene inseguita da Yagura e dagli Anbu di Kiri. Abbattono gli Anbu, eppure Yagura attinge al potere di Isobu e paralizza Itachi con il suo Palmo di Corallo prima che Jūzō lo liberi. Quando Yagura scaglia una Sfera dei Cercoteri, Jūzō la blocca al costo della sua spada, un frammento della quale lo trafigge. Itachi risveglia l'Amaterasu e lascia Yagura in fin di vita, mentre Jūzō soccombe alla ferita. Alla successiva riunione dell'Akatsuki, emerge che Kakuzu ha ucciso il suo stesso compagno, Orochimaru tenta e fallisce di impadronirsi del corpo di Itachi, e Pain nomina Kisame come nuovo compagno di Itachi.
Pain informa l'Akatsuki sul suo obiettivo di raccogliere i Cercoteri. Jūzō e Itachi portano a termine una missione nel Paese dell'Acqua e vengono inseguiti da Yagura e dagli Anbu di Kiri. Yagura incanala il potere di Isobu e paralizza Itachi, ma Jūzō lo protegge da una Sfera dei Cercoteri al costo della propria vita. Itachi risveglia l'Amaterasu e quasi uccide Yagura. Tornati all'Akatsuki, si scopre che Kakuzu ha ucciso il suo stesso compagno, Orochimaru fallisce nel tentativo di impossessarsi di Itachi e viene sconfitto, e Kisame viene assegnato come nuovo compagno di Itachi.
L'episodio 456 di Naruto: Shippuden è L'oscurità dell'Akatsuki, in cui Itachi e Juzo Biwa completano una missione nel Paese dell'Acqua e vengono inseguiti dal Quarto Mizukage Yagura. Itachi risveglia l'Amaterasu lasciando Yagura in fin di vita, ma Juzo muore proteggendolo da una Bomba del Cercoterio.
In The Darkness of the Akatsuki, Yagura paralizza Itachi con la sua tecnica del Palmo di Corallo dopo aver attinto al potere di Isobu. Itachi risveglia l'Amaterasu in risposta e lascia Yagura in fin di vita.
Juzo Biwa muore in The Darkness of the Akatsuki dopo aver bloccato una Tailed Beast Ball diretta a Itachi, venendo trafitto nel processo da un frammento della sua stessa spada in frantumi.
In The Darkness of the Akatsuki, Pain nomina Kisame come nuovo partner di Itachi nell'Akatsuki dopo la morte di Juzo. Lo stesso incontro rivela che Kakuzu ha ucciso il proprio partner e che Orochimaru ha fallito nel tentativo di impossessarsi del corpo di Itachi.
In The Darkness of the Akatsuki, Pain informa i membri di Akatsuki sulla crescente notorietà dell'organizzazione e sul suo obiettivo di raccogliere tutti i Tailed Beasts.
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