淡いブルーのボブヘアの下に覗く深紅の瞳は、アニメ界でも屈指の印象的なビジュアルをレイに与えている。前髪は額の中央で分けられ、華奢な体つきと血色の薄い蒼白な肌が特徴である。シンジと初めて出会ったとき、彼女は負傷したばかりで、片腕をギプスで固定し、片目を眼帯で覆っており、その姿自体がアイコンとなった。
学校では標準の制服を着用しているが、黒いアンクルソックスに白いローファーを合わせるなど、クラスメイトとは一線を画す細かなこだわりが見られる。キャラクターデザインの貞本義行は、アスカの対極をなす色彩として、彼女の赤い瞳と青い髪を意図的に描いた。
物語の開始当初、レイは極めて内向的で、クラスメイトたちは彼女の考えをまったく読み取ることができない。めったに口を開かず、感情をほとんど表に出さず、第3新東京市にある殺風景で家具もほとんどないマンションで一人暮らしをしており、その部屋の空虚さは彼女の内面を映し出している。彼女が当初唯一心を開き献身を見せる対象は碇ゲンドウだが、その絆でさえ冷ややかで距離感のあるものである。本棚には心理学や遺伝学の付箋付き医学書(中にはドイツ語で読んでいるものもある)が並び、個人的な知的好奇心を覗かせている。
無表情の裏には、蝕むような虚無的宿命論が存在する。自らを代わりがきく存在だと信じ込んでいる彼女は、自分が死んでも代わりがいると淡々と語る。庵野秀明監督は、彼女を自らの存在感をほとんど持たない極めて不幸せな少女として捉えるよう指示し、声優たちも無感情な人物としてではなく、感情というものを学ばずに育った人物として演じた。シンジとの接触は彼女を徐々に変化させていく。ラミエル戦の後に初めて心からの笑顔を見せ、後に理由もわからず涙を流し、最終盤には作られた目的に従うのではなく、自らの意思で絆を選ぶようになっていく。
テレビシリーズにおいて、レイの生い立ちは意図的に曖昧に保たれている。リツコは、彼女がNERV本部の地下深くにある隠された部屋で誕生したことのみを明かすが、関連資料によれば、2004年に碇ユイが初号機に取り込まれて姿を消した際、残された彼女の細胞から作られたと説明されている。ゲンドウは2010年、この幼い少女を知人の娘としてスタッフに紹介し、赤木ナオコはその姿がユイに酷似していると指摘する。後に渚カヲルは、自分たちは人間以外の魂を宿した人間の器という共通点を持つ同類であると語る。彼がアダムの魂を宿すのに対し、彼女はリリスの魂を宿している。ダミーシステム室の地下にある水槽には魂のないスペアの肉体がずらりと並べられており、レイが命を落とすたびに、その魂は記憶が曖昧になった状態で新たな肉体へと引き継がれる。
「レイ」の名を持つ存在は三代にわたる。幼少期の初代は、2010年に赤木ナオコによって絞殺される。二代目はテレビシリーズの大半に登場するレイであり、使徒アルミサエルを巻き込んで零号機を自爆させ、自ら命を絶つ。その後覚醒した三代目は『THE END OF EVANGELION』まで存在し、ゲンドウが描いたサードインパクトのシナリオを拒絶して、その主導権をシンジに委ねる。劇中では臨終を迎える人々の前に彼女の幻影が現れ、ラストシーンでは砂浜に立つシンジとアスカを幻影のレイが見つめている。また、テレビシリーズ最終話では彼女が感情豊かな普通の女子中学生であるパラレルワールドが描かれ、この設定は後に外伝作品『鋼鉄のガールフレンド2nd』(Angelic Days)でも掘り下げられた。
貞本義行によるコミカライズ版では彼女の感情変化がより強調されており、シンジへの恋心を強く匂わせるとともに、彼の生活における母性的な存在として描かれている。その他の派生作品ではさらにアレンジが加えられ、『学園堕天録』ではロンギヌスの槍を携えた秘密の使徒ハンターとして登場し、『碇シンジ育成計画』では明るくシンジをからかう親戚として再構築されている。彼女がポップカルチャーに与えた影響は絶大であり、無口で儚げな髪色のヒロイン像をアニメ界全般に定着させた立役者と評されている。初期のブーム期には、眼帯と包帯姿のレイのグッズが作品中で群を抜く売上を記録した。
TVアニメ『新世紀エヴァンゲリオン』における綾波レイの感情は曖昧に保たれていますが、貞本義行による漫画版では、彼女が碇シンジに恋をしていることが強く示唆されており、彼にとって母性的な存在としても位置づけられています。
いいえ、レイは文字通りの意味で碇シンジの母親というわけではありません。彼女は碇ユイ(シンジの母親)がエヴァンゲリオン初号機へ取り込まれ消滅した後に、ユイの回収できたデータや肉体から作られたクローンであり、生物学的な親というよりも遺伝的にユイと結びついた存在です。
厳密には違います。3人目のレイはゲンドウのシナリオに従うのではなく、サードインパクトの主導権をシンジに委ねることを選びます。しかし『Air/まごころを、君に』のラストは彼女の幽霊のような幻影の姿で締めくくられており、生身のまま生き残ったというよりは、人類補完の事象の中に溶け込んだことを示唆しています。
綾波レイはリリスの魂の器であり、ファーストチルドレンとしてエヴァンゲリオン零号機に搭乗する。最終的に彼女の選択がサードインパクトの結末を決定づけるため、NERVの真の目的を解き明かす上で中核となる存在である。
綾波レイは作中で少なくとも2回死亡している。最初の個体は2010年に赤木ナオコに絞殺され、2番目の個体は使徒アルミサエルを撃滅する際に零号機を自爆させた。その後、3番目の個体が目覚め、『新世紀エヴァンゲリオン劇場版』まで物語を引き継ぐ。
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